Аннотация результатов, полученных в 2014 году
Цель исследования: выявление маркеров высокого риска ишемической болезни сердца (ИБС) и хронической болезни почек (ХБП) у больных сахарным диабетом (СД) 2 типа на основе изучения механизмов развития хронического воспаления и аномального ангиогенеза. Впервые у больных СД проведен полилокусный анализ промоторных участков генов провоспалительных и противовоспалительных цитокинов (TNFА С863А, TNFА G308A, TNFА G238A, IL1B T31C, IL4 C590T, IL6 G174C, IL10 C592A), фактора роста эндотелия сосудов (VEGFА: А2578С и С936Т) и матриксных металлопротеиназ (MMP2 T1306C, ММР3 5A/6A, MMP9 С1562T). Исследование однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) проведено у 222 больных с использованием технологии TaqMan (TaqMan SNP Genotyping Assays). С помощью биоинформационного анализа выделены комбинации генотипов, ассоциированные с развитием ИБС и ХБП. Установлено, что наличие ИБС у больных СД 2 типа ассоциировано с наличием аллеля G и генотипа GG в позиции -308 гена TNFA (OR=2,24, р=0,01 и OR=2,45, p=0,008 соответственно), генотипа СС в позиции -174 гена IL6 (OR=2,0, р=0,04). Наличие аллеля А в позиции -308 гена TNFA и генотип 5A6A гена MMP3 ассоциированы с отсутствием ИБС (OR=0,45, р=0,01 и OR=0,51, р=0,02). Выделено 27 комбинаций генотипов, ассоциированных с наличием ИБС с вероятностью р<0,001. В составе данных комбинаций генов выявлено преобладание гомозиготных вариантов СС и GG в позициях -863 и -308 TNFA, -592СС IL10, +936СС VEGFА, 5А5А ММР3, -1562СС ММР9. В составе комбинаций, ассоциированных с ХБП, наиболее часто встречались генотипы -308GG и -238GG TNFА, -31TT IL1В, -590СС IL4, -174GG IL6, +936СС VEGFA, 5A/5A ММР3, -1562CC MMP9. Высокие значения относительного риска и специфичности указанных комбинаций позволяют рассматривать их как высоковероятные предикторы осложнений, пригодные для персонифицированного прогноза. Проведены исследования концентраций цитокинов и хемокинов: макрофагального колониестимулирующего фактора (M-CSF), макрофагального воспалительного протеина 1alpha (MIP-1alpha), фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (MIF), интерлейкина-6 (IL-6), интерлейкина-4 (IL-4), интерлейкина-10 (IL-10) в сыворотке крови у больных СД 2 типа и у здоровых лиц методом ELISA. Концентрация M-CSF, MIP-1alpha, MIF, IL-6 и IL-10 была повышена, a уровень IL-4 снижен, у больных СД 2 типа в сравнении с контролем (р<0,05). Наличие ИБС у больных СД 2 типа ассоциировано с низким уровнем IL-4 (p=0,001) и повышенным уровнем IL-6 (p=0,03). Пациенты, имеющие снижение скорости клубочковой фильтрации (<60 мл/мин/1,73 м2), в сравнении с больными без снижения, имели более высокий уровень M-CSF (p=0,02), MIP-1alpha (р=0,02) и повышенную мочевую экскрецию коллагена IV типа (р=0,01). Концентрации M-CSF, MIP-1alpha и IL-6 положительно коррелировали с мочевой экскрецией альбумина (r=0,34, r=0,28 и r=0,28 соответственно, р<0,05) и коллагена IV типа (r=0,31, r=0,4 и r=0,43 соответственно, р<0,05). Концентрация M-CSF и IL-6 была ассоциирована с ожирением. Полученные данные подтверждают концепцию о роли хронического воспаления низкой интенсивности в патогенезе микро- и макрососудистых осложнений СД. Ожирение и иммуногенетические детерминанты могут вносить вклад в формирование диабетических ангиопатий.

Аннотация результатов, полученных в 2015 году
Цель исследования: выявление маркеров высокого риска ишемической болезни сердца (ИБС) и хронической болезни почек (ХБП) у больных сахарным диабетом (СД) 2 типа на основе изучения механизмов развития хронического воспаления и аномального ангиогенеза. В 2015 году проведен анализ 10 параметров вариабельности уровня глюкозы (ВГ) по данным непрерывного мониторирования гликемии у больных СД 2 типа, изучена связь параметров ВГ с развитием ИБС и ХБП, хроническим воспалением, нарушениями регуляции ангиогенеза. Установлено, что больные СД 2 типа, получающие базис-болюсную инсулинотерапию и имеющие скорость клубочковой фильтрации (СКФ) в диапазоне 30-44 мл/мин/1,73 м2 (ХБП 3б стадии), имеют меньшую вариабельность гликемии, преимущественно в гипергликемическом диапазоне, по сравнению с больными СД с более высокими значениями фильтрации. В моделях многофакторного регрессионного анализа выявлено достоверное влияние СКФ на показатель среднечасовой скорости изменения гликемии MAG (b=0,23, R2=0,2, p=0,04). У больных СД 2 типа с ИБС зафиксирована более высокая среднечасовая скорость изменения гликемии MAG в ночные часы по сравнению с пациентами без ИБС (р=0,05 и р=0,01 соответственно). У 210 больных СД 2 типа и у 30 лиц контрольной группы проведены исследования концентрации в сыворотке крови белков острой фазы: С-реактивного белка (hsCRP) и кислого α1-гликопротеина (α1-AGP) методом иммуноферментного анализа, а также адипоцитокинов (IL-6, IL-8, IL-18, TNF-α и PAI-1) методом проточной флуориметрии (PLEX-анализа). Уровни hsCRP, α1-AGP, IL-6, IL-8, IL-8, TNF-α и PAI-1 были достоверно повышены у больных СД 2 типа с ожирением в сравнении с контролем. У больных без ожирения только концентрация hsCRP, α1-AGP и IL-8 превышала контроль. Изучена связь уровня воспалительных маркеров с композитным составом тела, по данным двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии, и индексами ВГ. Установлено, что масса жировой ткани и отношение массы туловищного жира к общей массе жировой ткани являются независимыми предикторами уровня hsCRP (β=0,528 и β=0,408 соответственно, R2=0,36, p=0,006). Концентрации α1-AGP и цитокинов не показали значимых взаимосвязей с параметрами композитного состава тела. Уровень α1-AGP, но не других маркеров, показал положительную связь со средним уровнем глюкозы по данным непрерывного мониторинга (r=0,38) и параметрами ВГ, отражающими колебания уровня глюкозы преимущественно в гипергликемическом диапазоне (CONGA2: r=0,36; J-индекс: r=0,36, р<0,001). Определены иммуногенетические детерминанты развития хронического воспаления низкой интенсивности у больных СД 2 типа. Установлены комбинации полиморфных вариантов промоторных областей генов цитокинов (IL1В: С31Т, IL4: С590Т, IL6: G174C, IL10: A592C и А1082G, TNFА: А238G, A308G и A863C), ассоциированные с высоким и низким уровнем hsCRP и alpha1-AGP в сыворотке крови. Выделено 8 комбинаций генотипов, достоверно ассоциированных с высоким уровнем hsCRP и 5 комбинаций, ассоциированных с высоким уровнем alpha1-AGP. В составе данных комбинаций наиболее часто выявлялся гомозиготный вариант гена AA в позиции -1082 гена IL10. Проведены исследования продукции цитокинов (IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α), матриксных металлопротеиназ 2 и 9 типа (MMP-2, MMP-9), оксида азота NO мононуклеарными лейкоцитами периферической крови в базальных условиях и при культивировании с конканавалином А у 90 больных СД 2 типа и у 30 лиц контрольной группы. Установлено снижение спонтанной и стимулированной продукции IL-1β (р<0,0001 и р=0,01 соответственно), IL-6 (p=0,001 и р<0,0001), TNF-α (р=0,003 и р=0,03) и повышение продукции IL-10 (р<0,0001 и р<0,0001 соответственно) у больных СД 2 типа. Выявлено повышение стимулированной продукции MMP-9 у больных СД 2 типа в сравнении с контрольной группой (р=0,03), при отсутствии достоверных различий в базальной продукции фермента. Обнаружено резкое увеличение спонтанной и стимулированной продукции оксида азота NO мононуклеарами у больных СД 2 типа (p<0,00001). Показаны положительные корреляции между продукцией NO и концентрациями hsCRP, α1-AGP в крови (спонтанная продукция: r=0,53 и r=0,47 соответственно; стимулированная продукция: r=0,43 и r=0,45). Не выявлено взаимосвязи между продукцией цитокинов, матриксных металлопротеиназ и оксида азота NO с наличием ИБС и выраженностью поражения почек, средним уровнем и краткосрочной вариабельностью уровня глюкозы. Исследована концентрация регуляторов ангиогенеза: пептидов семейства фактора роста эндотелия сосудов (VEGF-A, VEGF-B и VEGF-C) в сыворотке периферической крови у 196 больных СД 2 типа и у 25 лиц контрольной группы. У больных СД выявлено снижение уровня VEGF-A и VEGF-C по сравнению с контролем (р=0,03 и р=0,006 соответственно). Уровень VEGF-D демонстрировал тенденцию к снижению (р=0,14). У больных СД с ИБС, в сравнении с остальными пациентами, зафиксировано повышение уровня VEGF-A (р=0,04). Уровень VEGF-A, VEGF-C и VEGF-D у больных с ИБС оставался ниже, чем в контроле (p=0,03, p=0,004 и p=0,05 соответственно). Выявлено повышение концентрации VEGF-A у больных с хронической сердечной недостаточностью по сравнению с пациентами без данного осложнения (р=0,02). Анализ SNPs гена VEGFA не выявил взаимосвязи между частотой аллелей и генотипов в полиморфной позиции -2578 A/С (rs699947) и наличием ИБС. Вместе с тем, аллель С и генотип СС в положении +936 (rs3025039) оказались ассоциированы с ИБС. Минорный аллель T и генотип СТ в данной позиции выявлялись достоверно чаще в группе больных без ИБС (р=0,02). Взаимосвязь аллеля С с ИБС сохранялась в многофакторном логистическом анализе, после учета «традиционных» факторов риска ИБС (р=0,03). Присутствие аллеля Т в положении +936 гена VEGFA было ассоциировано с более высокой концентрацией VEGF-А в сыворотке крови (р=0,005). Пациенты с генотипом CT имели более высокий уровень VEGF-А по сравнению с больными с генотипом СС (р=0,003). Полученные данные расширяют представления о механизмах развития хронического воспаления и нарушениях регуляции ангиогенеза у больных СД 2 типа.

Аннотация результатов, полученных в 2016 году
На этапе 2016 года, изучены концентрации циркулирующих регуляторов ангиогенеза у больных сахарным диабетом (СД) 2 типа в зависимости от наличия ишемической болезни сердца (ИБС) и хронической болезни почек (ХБП). C помощью мультиплексного анализа определены концентрации ангиопоэтина-2, эпидермального фактора роста (EGF), гепарин-связывающего EGF-подобного фактора роста (HB-EGF), эндоглина, растворимого Fas лиганда (sFASL), ИФР–связывающего протеина 1 типа (IGF-BP1), плацентарного фактора роста (PLGF), трансформирующего фактора роста альфа (TGF-alpha), тканевого ингибитора активатора плазминогена урокиназного типа (uPA), растворимого CD40 лиганда (sCD40L) в сыворотке крови у 196 больных и у 30 лиц контрольной группы. У больных СД в сравнении с контролем выявлено снижение концентрации эндоглина (р=0,01), PLGF (р=0,04), IGF-BP1 (р=0,03) и uPA (р=0,01). Пациенты с СД и ИБС, в сравнении с пациентами без ИБС, имели более высокий уровень циркулирующего ангиопоэтина-2 (р=0,02) и TGF-α (р=0,02). У больных СД с хронической сердечной недостаточностью (ХСН) в сравнении с пациентами без ХСН выявлено повышение уровня ангиопоэтина-2 (р=0,002), HB-EGF (р=0,01), sFASL (р=0,048), PLGF (р=0,008) и TGF-α (р=0,003). Однако, даже в этой группе больных уровень ангиогенных факторов роста не превышал контрольный. Очевидно, это отражает снижение чувствительности к гипоксии у больных СД. Наиболее выраженные изменения концентрации регуляторов ангиогенеза зафиксированы у больных с макроангиопатией нижних конечностей, осложненной хронической ишемией. Больные данной подгруппы имели более высокий уровень PLGF (р=0,01), эндоглина (р=0,01), IGF-BP1 (р=0,03), sFASL (р=0,03), TGF-α (р=0,02) и uPA (р=0,01) по сравнению с пациентами без хронической ишемии. У больных со скоростью клубочковой фильтрации (СКФ) <60 мл/мин/1,73 м2 обнаружена более высокая концентрация ангиопоэтина-2 по сравнению с больными с СКФ >60 мл/мин/1,73 м2 (р=0,03). Остальные исследованные маркеры не показали связь с ХБП. Таким образом, концентрация регуляторов ангиогенеза в сыворотке крови у больных СД 2 типа зависит главным образом от выраженности макрососудистых осложнений, протекающих с ишемией. При корреляционном анализе не выявлено взаимосвязей между концентрацией исследованных регуляторов ангиогенеза и уровнем HbA1c, средним уровнем гликемии и показателями вариабельности гликемии, рассчитанными по данным непрерывного мониторинга уровня глюкозы. Вместе с тем, концентрации ангиогенных пептидов продемонстрировали слабые отрицательные взаимосвязи с содержанием острофазовых белков: С-реактивного протеина, определенного высокочувствительным методом (hsCRP) и α1-кислого гликопротеина (α1-AGP). Таким образом, изменения концентрации маркеров воспаления и ангиогенеза при СД носят разнонаправленный характер. Определены взаимосвязи однонуклеотидных полиморфизмов (SNPs) в промоторах генов IL4, IL6, IL10 и TNFA с уровнем соответствующих цитокинов в сыворотке крови у 145 больных. Установлено, что полиморфизмы генов IL4 (rs1800795), IL6 (rs1800795), IL10 (rs1800872) и TNFA (rs1800630) оказывают влияние на концентрацию цитокинов. С помощью мультиплексного анализа определены концентрации в сыворотке крови адипокинов (лептина, резистина, висфатина, адипсина, адипонектина), гормонов желудочно-кишечного тракта (ГПП-1, ГИП, грелина) и гормонов поджелудочной железы (С-пептида, инсулина, глюкагона) у 125 больных и у 30 лиц контрольной группы без ожирения и нарушений углеводного обмена. У больных СД 2 типа, в сравнении с контролем, зафиксированы более высокие уровни лептина (р=0,004), резистина (р<0,0001), адипсина (р<0,0001), висфатина (р=0,0003), инсулина (р=0,01) и глюкагона (р=0,0002) в состоянии натощак. Концентрация грелина, напротив, оказалась сниженной (р<0,00001). Определены связи между концентрацией адипокинов, массой и распределением жировой ткани. Уровень лептина коррелировал с общей массой жировой ткани (r=0,58, p<0,00001), массой жира на туловище (r=0,65, p<0,00001), в центральной области живота (r=0,55, p<0,00001) и на бедрах (r=0,63, p<0,00001). Уровень адипсина был связан с массой жира на туловище (r=0,43, р=0,0004), а уровень резистина – в массой жира в центральной области живота (r=0,41, р=0,0008). Концентрация PAI-1 прямо коррелировала с долей туловищного жира (r=0,43, р=0,0004). Концентрация адипонектина не была взаимосвязана с массой жировой ткани, но демонстрировала обратную взаимосвязь с соотношением массы жира в центральной области живота и на бедрах (зоны android/gynoid: r=-0,54, p<0,00001). Определены взаимосвязи между концентрацией гормонов и морфологическими характеристиками подкожной жировой ткани: размером адипоцитов, объемной и количественной плотностью микрососудов, включая сосуды кровеносного (СD34+) и лимфатического (подопланин+, LYVE+) русла. Выявлена положительная корреляция между концентрацией лептина и средним диаметром подкожных адипоцитов (r=0,43, p=0,03). Другие исследованные маркеры с данным параметром не коррелировали. У пациентов с ожирением, в сравнении с больными без ожирения, зафиксировано увеличение объемной плотности лимфатических сосудов (LVDv) и количественной плотности лимфатических сосудов (LVDq), дающих положительную иммуногистохимическую реакцию на подопланин. В лимфатических капиллярах выявлено набухание цитоплазмы, митохондрий, цистерн гранулярной эндоплазматической сети и сниженное содержание микропиноцитозных везикул. Найденные изменения могут свидетельствовать об активации лимфангиогенеза и нарушении лимфатического дренажа в подкожной жировой клетчатке при ожирении. Обнаружены отрицательные корреляции между уровнем лептина, адипсина и количественной плотностью микрососудов в подкожной клетчатке (r=-0,53, p=0,003 и r=-0,32, p=0,05 соответственно). У больных СД с ИБС выявлены достоверно более высокие уровни лептина (р=0,02), адипсина (р=0,02) и висфатина (р=0,04) по сравнению с пациентами без ИБС, что может объясняться большим ИМТ (р=0,02). У больных СД с ХБП (СКФ 30-59 мл/мин/1,73 м2) зафиксирована более высокая концентрация грелина (р=0,01) и тенденция к увеличению уровня адипсина (р=0,07). Не выявлено связей между уровнем адипокинов, концентрацией ангиогенных факторов роста и острофазовых белков. Полученные данные расширяют представления о механизмах развития хронического воспаления и нарушений регуляции ангиогенеза у больных СД 2 типа.