Аннотация результатов, полученных в 2016 году
На первом этапе выполнения проекта рассмотрены ткани сердец и аорт Sus scrofa и Bos taurus как источники биологически активных белков и пептидов, проведена идентификация тканеспецифичных веществ белковой природы длиннейшей мышцы спины Sus scrofa и Bos taurus. Показано, что в тканях сердца и аорты Bos taurus и Sus scrofa содержатся практически идентичные мажорные белки. При этом в тканях аорт Sus scrofa выявлен ряд белков теплового шока (менее 30 кДа), пре- и аполипопротеин А-1,; пероксиредоксин-1 в смеси с трансгелином и галектин-1; в тканях сердца Sus scrofa выявлен белок, связывающий жирные кислоты. Отмечено, что наименьшее содержание пептидов молекулярной массой до 2000 Да отмечалось в тканях сердца (Sus scrofa – 6, Bos taurus – 3); наиболее высокое содержание тканеспецифичных пептидов отмечено в аорте (Sus scrofa – 22 пептида; Bos taurus – 8). Охарактеризованы структурные и функциональные белки тканей длиннейшей мышцы спины Sus scrofa и Bos taurus, в том числе вовлеченные в процессы мышечного сокращения, образования и аккумуляции энергии, антиокислительных процессов и пр. В нативной свинине и говядине обнаружен широкий спектр веществ пептидной природы регуляторного и сигнального порядка. Изучено влияние автолитических процессов и ферментативного протеолиза на генерацию низкомолекулярных фрагментов из структурных мышечных и соединительнотканных белков как источников закодированных функциональных и маркерных последовательностей. Протеомный анализ спектра белков мышечного и немышечного происхождения в образцах длиннейшей мышцы спины Sus scrofa (на 1, 3 и 5 сутки автолиза) и Bos taurus (на 1 и 9 сутки автолиза) в зависимости от его характера (быстрый, нормальный, медленный) выявил ряд качественных и количественных различий. Времяпролетная масс-спектрометрическая идентификация более 130 белковых фракций позволила выявить перспективные биомаркеры мышечного и немышечного происхождения. Отмечена корреляция распада мышечных белков (тропониновой группы/ семейства тропонинов) и характеристик мяса: процесс распада тропонина более выражен в образцах с нормальным автолизом и менее интенсивен в образцах с аномальным автолизом, как быстрым, так и медленным. Процессы распада белков в образцах мясного сырья с медленным автолизом происходят менее выраженно. Анализ пептидного состава показал, что автолитические процессы со временем приводят к увеличению количества пептидов, однако в свинине с быстрым автолизом выявляется наименьшее количество пептидов. Наибольшее количество низкомолекулярных соединений отмечено в свинине с медленным автолизом. Основные различия между типами мяса наблюдались в областях свыше 1000 Да, в диапазонах 900–999 Да и 600–700 Да. Свинина с быстрым автолизом до автолиза характеризовалась 8 характерными пептидами, к 3-м суткам автолиза их количество увеличивалось до 9, к 5-м – до 15; свинина с нормальным автолизом, представленная до автолиза 14 характерными пептидами, к 3-м суткам автолиза их количество увеличивалось до 27, к 5-м – до 32; в свинине с медленным автолизом до автолиза отмечено 18 характерных пептидов, к 3-м и 5-м суткам – 38. Исследование влияния сохранности обнаруженных тканеспецифичных белков тканях аорт Sus scrofa показал, что идентифицированные в нативных образцах функциональные тканеспецифичные белки (менее 30 кДа) (пре- и аполипопротеин А-1, пероксиредоксин 1 в смеси с трансгелином и галектин-1, подверглись протеолизу в процессе 4-х суточного автолиза. Обнаруженный в ткани сердца Sus scrofa, белок, связывающий жирные кислоты, устойчив к автолитическим ферментам. Проведенный сравнительный анализ избирательной ферментативной активности протеаз микробиологического, растительного и животного происхождения, в том числе методами протеомного анализа, в модельных мясных системах на основе мышечной и соединительной ткани, выявил очевидное преимущество использования микробных ферментов. Направленный ферментолиз модельных мясных систем (сырокопченых колбас) с использованием стартовых образцов коммерческой (Bactoferm SM 194) и собственной бактериальной композиции (Lactobacillus sakei KD-1, Staphylococcus carnosus S-1, Lactobacillus plantarum 19) показал преимущество разработанной бактериальной композиции, позволяющей получить мясной продукт, не уступающий по органолептическим показателям продукту с использованием импортных бактериальных препаратов. Электрофоретическое исследование выявило характерный селективный протеолиз определенных типов структурных белков: количественное уменьшение белковых веществ молекулярной массой свыше 70 кДа; присутствие в небольших количествах гемоглобина, миоальбумина и миогена, несколько изоформ миозина и изоформы тропомиозина. Изучены ферментов микробного происхождения – стартовые культуры L. plantarum 100, L. sakei 105, L. sakei 103, L. curvatus 2, L. sakei 45 на модельной мясной системе (говядина с нормальным течением автолиза, 109 КОЕ/г). Показано, что наибольшей активностью и избирательностью к рестрикции обладают ферментные системы штамма L. sakei 105 и L. curvatus 2. На композиции были получены Справки о депонировании. По результатам исследований опубликовано 2 статьи в журналах, входящих в базы данных Web of Science и Scopus, 6 статей в журналах, входящих в базу данных РИНЦ, 10 статей было опубликовано в материалах конференций. Результаты освещены на 5 международных конференциях в рамках устных и стендовых докладов.

Аннотация результатов, полученных в 2017 году
С помощью цитохимического метода проведено исследование накопления и внутриклеточной локализации гликогена в M. longissimus dorsi Sus scrofa с различным характером посмертных автолитических превращений (быстрый, нормальный, медленный). Показано значительное изменение содержания гликогена в тканях: через 24 часа уменьшение в 1,5 раза, а через 48 часа почти в 2 раза. Выявлена корреляция высокого содержания гликогена, высокой активностью эндогенных ферментов, низким рН, малым количеством миофибриллярных белков семейства тропонинов и миозинов, а также накоплением в мышечной ткани фрагментов пируваткиназы, α-енолазы, мышечной креатинфосфокиназы и глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы, тропонина I, аденилаткиназы, α-В кристаллина, легких цепей миозина и кофилина 2. Более высокая скорость протеолиза миофибриллярных белков в скелетных мышцах, характеризующихся быстрой скоростью протекания автолиза, может быть обусловлена промышленным способом выращивания свиней, характеризующимся интенсивным ростом мышечной массы, что, в свою очередь может вызывать изменение метаболизма мышц в сторону более гликолитического и менее окислительного типа, что открывает возможности in vivo воздействия на соотношение волокон разного типа, а также на направленное управление скоростью автолиза. Проведенный сравнительный анализ одномерных электрофореграмм образцов мышечных тканей Bos Taurus и Sus scrofa, обработанных протеазами (растительного (папаин и бромелайн) и животного (пепсин, трипсин), смешанного (лекарственный препарат «Фестал» и микробного (стартовые культуры) происхождения), показал, что накопление низкомолекулярных белков сопряжено с изменением концентрации животных и растительных протеаз, при этом более глубокую деструкцию белков Sus scrofa вызывали бромелайн и трипсин, а на белковый профиль Bos Taurus более эффективно воздействовали папаин, пепсин, трипсин и «Фестал». Показано, что наиболее эффективным для накопления тканеспецифичных и тканегенерируемых биоактивных белков и пептидов в сырье является протеолиз под действием эндогенных протеаз в анаэробных условиях в течение 7 сут. Оптимальными концентрациями воздействия определены: растительные протеазы (папаина и бромелайна) в концентрации 1,5%, животных (пепсина и трипсина) – в концентрации 0,5%. В отношении микробных препаратов показано отличие от обработки животными и растительными протеазами, при этом эффект можно представить в виде ряда 8902→8901→8906→8905 (40%→34%→26%→19%). Наиболее выраженный эффект был у вида Pediococcus, что позволяет рассматривать как более перспективные для промышленных технологий. Исследование спектров коротких пептидов, генерируемых различными типами протеаз, показало, что естественный автолитический процесс стабильно образует большое количество разнообразных пептидов в широком диапазоне масс от 500 Да до 180 кДа. Аналогичным эффектом обладала стартовая культура ВКПМ-8905, а далее следовало обеднение спектров короткими пептидами в следующей последовательности: ВКПМ-8901→папаин→пепсин/ВКПМ-8906→бромелайн →трипсин/ ВКПМ-8902→Фестал. Изучение in vitro и ex vivo тканеспецифического и биологического действия белков и пептидов, а также полученных смесей рестриктов, проведенное на эксплантатах органов и клеточных линиях показало, что нативные экстракты говядины, обработанной стартовыми культурами не обладали выраженным пролиферативным действием на эксплантаты анализируемых тканей, а смеси рестриктов этих образцов, полученных после digestion model различались выраженностью проявляемой активности. Выявлено, что рестрикты образцов с ВКПМ-8902 стимулировали рост тканей как эктодермального происхождения (ИП эксплантатов головного мозга составили 90,8%), мезодермального происхождения (ИП эксплантатов сосудов и скелетной мускулатуры превышали контроль на 12% и 27%) и энтодермального происхождения (ИП тканей слизистой оболочки желудка и кишечника увеличивались более чем на 130% относительно контроля). При этом образец с ВКПМ-8901 и 8906 стимулировал рост тканей мезодермального и энтодермального происхождения (увеличивая ИП эксплантатов более чем на 40%). Анализ биологического эффекта белковых веществ тканей аорт Sus scrofa показал неоднородность результатов: относительно тканей энтодермального происхождения отмечено ингибирование роста (ИП слизистой кишечника снижался на 4,85 % (р < 0,1), слизистой желудка незначительно увеличивался на 1,3% относительно контроля), мезодермального и энтодермального происхождения – стимуляция пролиферации (до 16% относительно контроля). Была выявлена зависимость тканеспецифического действия от молекулярной массы активных веществ. Показано, что среднемолекулярные фракции, содержащие вещества массой 5-30 кДа, оказывают выраженное тканеспецифичное действие на эксплантаты аорты куриного эмбриона – увеличивая ИП эксплантатов на 56,6±5,2 %, по сравнению с контрольными значениями, при этом низкомолекулярные фракции, содержащие вещества менее 5 кДа, более выраженно стимулировали рост эксплантатов аорты стареющих крыс (ИП превышал показатели среднемолекулярных фракций более чем на 30%). При исследовании эффекта хранения скелетной мышцы Bos taurus в анаэробных и аэробных условиях было выявлено сохранение стандартного распределения мажорных фракций сократительного и ферментного аппарата. При анаэробных условиях для ряда мажорных белков, таких как Г3ФД, альдолаза А, мышечная креатинфосфокиназа и енолаза, тропонин I отмечалась определенная размытость контуров электрофоретических фракции, очевидно как результатов автолитических воздействий, и переработки части белковых молекул через образование чуть более коротких фрагментов. Исчезла верхняя электрофоретическая фракция ЛЦМ 1/3 (ее количество меняется в соответствии с пропорцией в образце волокон быстрого и медленного типа, и очевидно разной скоростью утилизации для разных типов волокон) скелетной мышцы, но появился и начал увеличиваться в количестве его фрагмент, и на 4 сутках появился характерный трек агрегата белка 1, содержащего четыре с половиной LIM домена. При аэробном хранении выявлено нарастание количества белкового материала в треке агрегата белка 1, содержащего четыре с половиной LIM домена. К 7 суткам образовались очень характерные треки практически всех мажорных белков: актина, миоглобина, мышечных КФК и енолазы, альдолазы А. Притом эти треки равномерно уменьшались по массе, что свидетельствовует о равномерном отщеплении N и C-концевых а.о. у молекул этих белков. В тоже время фракции структурных белков актомиозинового комплекса (за исключением актина) утилизировались сразу через образование коротких фрагментов определенной доли этих типов молекул (α и β тропомиозины, триозофосфатдегидрогеназа, ЛЦМ 2), а фракция ЛЦМ 1/3 автолизировалась через образование одного промежуточного фрагмента, выявлены фрагменты белка титина. Отдельно стоит отметить выявление полимерных форм белков (агрегатов) при изучении автолиза и протеолиза мясного сырья. Полученные нами результаты расширили спектр белков образующих олигомерные комплексы/агрегаты, что показывает необходимость изучения механизмов этого процесса с целью оценки влияния процессов на показатели качества (в т.ч. формирования нежности мясного сырья и образования функциональных пептидов). В целом, полученные результаты показали специфичную разнонаправленность действия разных типов протеаз – животные протеазы пепсин и трипсин последовательно утилизируют только определенную часть белков мышечной ткани, но при этом перерабатывают их до уровня коротких пептидов и аминокислот. Растительные протеазы папаин и бромелайн работают со всем спектром белков – утилизируют как высоко-, так и низкомолекулярные компоненты, при этом установлена корреляция образования белковых фрагментов в зависимости от типа мышечных волокон (быстрого/медленного типа автолиза). Наиболее высокой активностью обладает папаин, но ряд белков он перерабатывает через последовательное образование промежуточных фрагментов. Фестал, в силу сочетания комплекса ферментов переработки белков, углеводов и жиров, наиболее активно понижает общее количество белка (с образованием малого количества фрагментов), но и использование растительных протеаз в фармакопейных препаратах такого типа может представлять определенный интерес (более мягкое воздействие), и, возможно, и коммерческий (при разнице стоимости животного и растительного сырья). В мясной промышленности такие комплексы (гомологи Фестала с сочетанием протеолитического, амилолитического и липолитического действия) могут оказаться эффективными для получения широкого спектра коротких пептидов с функциональными свойствами. Очевидно, что идентификация коротких пептидов должно проводиться с использованием многомерной хроматографии, более адаптированной для работы с короткими пептидами. Полученные данные о различных механизмах рестрикции протеаз открывают перспективы для управления процессом получения специализированных биологически активных пептидов с прогнозируемым набором аминокислот и функциональными свойствами. Комплекс проведенных исследований позволил сформулировать основные принципы создания мясных модулей, технологии которых обеспечивали бы максимальное сохранение тканеспецифичных и тканегенерируемых белков и пептидов, включающие формирование рецептуры мясного модуля с использованием методов пищевой комбинаторики, обоснованных технологических решений для предотвращения потерь водорастворимых белков и пептидов (измельчение, составление рецептуры, упаковку, термообработку, охлаждение, контроль качества и соответствия). Таким образом, модуляция протеома мышечных тканей ферментами имеет потенциал как способ повышения функциональной направленности продукта. В соответствии с результатами проведенных исследований на следующем этапе проекта планируется получение мясных модулей специализированной направленности.

Аннотация результатов, полученных в 2018 году
Обширные протеомные исследования позволили установить, что агрегаты белков в мясном сырье образуются при воздействии только определенных типов протеаз, при этом эффект усиливается в присутствие свободного кислорода. Нами выявлены агрегации незначительной доли белков, отличающихся щелочными значениями pI. Указанные особенности не позволяют выявить подобные агрегации с помощью одномерного электрофореза или при использовании иммобилизованных градиентов рН. Для их выявления были подобраны условия и применен амфолиновый неравновесный вариант изоэлектрофокусирования с окрашиванием азотнокислым серебром, поскольку в большинстве случаев при окрашивании СВВ R-250 эффект агрегации не выявлялся. Выявленный эффект отмечен только на нескольких видах мышечных белков (миозин, миоглобин, тропонин I), которые участвуют в посмертных автолитических превращениях мышечных волокон и образовании поперечных связей/агрегации мышечных белков, способствуют снижению влагоудерживающей способности, сочности и нежности мяса и увеличению нежелательного вкуса (Moczkowska M., 2017; Lin Chen, 2015). Очевидно, что в дальнейшем эта агрегированная часть при воздействии экзогенных протеаз начинает в краевых зонах активно разрушаться и формирует набор фракций белка с меньшей мол. массой, образуя характерные треки. Этот белок участвует в процессе сборки саркомеров, взаимодействуя с миозин-связывающим белком С (McGrath M.J., 2006), и, очевидно, именно эта его функция и обуславливает формирование такого агрегата, что может быть существенным в тендеризации мясного сырья. Кроме того, возможны агрегации мышечных и растительных белков, как нами показано на примере соевых белков. Ухудшение процесса тендеризации мяса под действием протеаз в присутствии кислорода на ранних этапах протеолиза также может быть связано с отрицательным воздействием полимеризации белков на активность µ-кальпаина (Kim Y.H., 2010). Учитывая выявленные факты агрегации мышечных и растительных белков под воздействием широко используемых в технологической практике ферментов белков и возможное проявление антиалиментарных свойств, было принято решение при разработке технологии мясных модулей специализированного назначения не подвергать сырье обработке экзогенными ферментными системами. Образование агрегатов обнаружено в образцах сырокопченой колбасы со стартовыми культурами, в двух из них выявлены агрегаты белков сои, которые использовались в рецептуре мясного продукта. В контрольном образце (без добавления стартовых культур) присутствовали два агрегата фрагментов глицинина G1, в образце с добавлением стартовых культур МГУПП идентифицированы те же фрагменты и агрегат глицинина A3B4. В третьем агрегаты не были выявлены. Этот результат показывает, что формирование агрегатов происходит и с растительными белками при использовании некоторых типов протеаз в присутствии кислорода. Следует отметить, что в опытных образцах сырокопченых колбас также образуются фрагменты, а точнее агрегаты, таких белков, как актин, тропонин Т и миозин, что подтверждается результатами масс-спектрометрической идентификации. При исследовании колбас, ферментированных спонтанной микрофлорой, были выявлены также С-концевой фрагмент тяжелой цепи миозина, легкая цепь миозина 1/3, миоглобин. Представленные результаты расширяют знания о протеолизе, который происходит при производстве ферментированных колбас, а также свидетельствуют об их потенциале в качестве естественных источников биологически активных пептидов, что дает дополнительную ценность этим продуктам, о которых до сих пор недостаточно информации. Однако необходимы дальнейшие исследования для идентификации конкретных последовательностей, ответственных за наблюдаемые биологические активности. Мясные модули специализированного назначения были выработаны в промышленных условиях. Рецептурный состав консервов фаршевых (П): сердца свиней - 64,4 %, аорты свиней - 26,0 %, крахмал - 3,0 %, поваренная соль - 0,4 %, вода до 100 %. Сравнительный комплексный анализ мясного модуля – фаршевых консервов, выработанных в условиях опытного стенда и в промышленных условиях, показал полное соответствие физико-химических, протеомных и биокоррегирующих характеристик, что свидетельствует об устойчивости разработанной технологии и рецептуры. Сырокопченые колбасы (К1 – без обработки стартовыми культурами, К2 - с обработкой стандартной, применяемой в мясной промышленности, стартовой культурой Bactoferm SM 194 (Christian Hansen, Дания), К3 – с обработкой композицией холестеринснижающих cтартовых культур из коллекции ФГБОУ ВО МГУПП), в состав которых входят говядина, конина, жир, соевые гранулы и пряности, были выработаны по ТУ-9213-928-00419779-07. Биокорригирующий эффект продукта был изучен на модели хронической алиментарной гиперлипидемии in vivo. Для изучения холестерин-снижающего эффекта колбас была смоделирована острая гиперлипидемия in vivo согласно разработанным дизайнам. Введение в рацион животных с моделью алиментарной гиперлипидемии фаршевых консервов способствовало достоверному изменению липидного профиля, включая снижение липидов в сыворотке крови. Было показано, что внесение в рацион животных консервов фаршевых в течение 42 суток приводило к снижению концентрации холестерина и триглицеридов на 31,8% (Р<0,05) и 28,2% (недостоверно) по сравнению с контролем. У животных опытной группы наблюдалось перераспределение фракций липропротеинов: ХС ЛПНП и ХС не-ЛПНП и не-ЛПНП по сравнению с контролем снизились на 21,6% (Р<0,05) и в 2,4 раза (Р<0,05). ИА был снижен на 41,3 % (Р<0,05). Отмечалась положительная тенденция по восстановлению распределения популяций лейкоцитов. Это свидетельствует о целесообразности применения консервов в качестве дието-профилактики для людей с высоким риском развития атеросклероза. Проведенный анализ изменения липидов сыворотки крови экспериментальных животных, которых на протяжении 20 суток кормили исследуемыми колбасами, после введения Тритона Х-100 выявил, что наибольшее снижение концентрации ХС наблюдалось в группе крыс, получавших К3, и составило 32,0% (Р<0,05) по сравнению с контролем, преимущественно, за счет снижения ХС ЛПНП практически в 3 раза (Р<0,05). Однако ИА сыворотки крови животных, получавших опытные продукты, статистически значимо не отличались от контроля ввиду низкого содержания ХС не-ЛПНП и не-ЛПВП у контрольных крыс, который был достаточно высоким в остальных группах. По результатам масс-спектрометрической идентификации пептидов после моделирования пищеварения и проницаемости целевых веществ в соответствии с дизайном исследования in vitro образцов К1, К2, К3 и П было выявлено, что число образующихся веществ для образца К3 в 2 раза больше, чем для остальных, причем более 80% занимали 4 уникальных пептида, не встречающихся в остальных образцах. При изучении состава, органолептических и физико-химические характеристик консервов фаршевых выработки 2017 и 2018 гг, а также сравнительного изучения протеомного профиля, различий выявлено не было, что свидетельствует о высоком потенциале воспроизводимости технологии, правильности рецептуры, устойчивости белков, выбранных в качестве маркеров, и набора тканеспецифичных белков в процессе длительного (не менее 12 месяцев) хранения продукта при температуре не выше 20оС. Было установлено, что исходный материал сырья, заложенный в банки, практически полностью соответствует по белковому составу ткани миокарда свиньи с некоторым количеством белков крови, что детектируется по наличию большого количества фракций α и β-гемоглобина. После стерилизации успешно детектируются фракции α- и β-тропомиозинов, эссенциальных и щелочных легких цепей миозина, αB кристаллина, миоглобина и β-гемоглобина, сердечного актина, α-гемоглобина и белка теплового шока 27 кДа. Очевидно, что данные виды белков являются термостабильными и могут быть использованы как маркеры контроля надлежащих режимов стерилизации. Фракции миоглобина оказались в разной степени модифицированы после термообработки. Маркерами тканеспецифичности для продуктов из данного сырья могут служить фракции сердечного тропонина Т, мышечной изоформы креатинфосфокиназы, миоглобина тканеспецифичные изоформы тропомиозинов, белка, переносящего жирные кислоты, и трансгелина (белка медиального/гладкомышечного слоя) аорты. В результате стерилизации у некоторых белков наблюдались модификации аминокислотной цепи, другие распадались на фрагменты одноименных белков, третьи – вовсе переставали детектироваться. Выработанные сырокопченые колбасы, обработанные стартовыми культурами, имели сопоставимый физико-химический состав. По сравнению с контролем в обоих опытных образцах (К2 и К3) в 2,5 раза возросло содержание свободной глутаминовой кислоты, в 2–2,6 раза – свободного цистина, в 1,8 раза снизилось содержание гистидина. При изучении микрофлоры ферментированных мясных модулей – сырокопченых колбас с использованием метода T-RFLP максимальное количество лактобактерий выявлено в образце К3 (69,6%) и К1 (66,4%), минимальное значение выявлено в образце К2 (57,9%). Большое количество молочнокислых микроорганизмов в образце К1, выявленных методами T-RFLP и ПЦР-РВ, объясняется развитием спонтанной молочнокислой микрофлоры, не всегда гомоферментативной, негативно влияющей на качество ферментированных мясных продуктов. Было установлено, что микрофлора всех исследованных образцов сырокопченой колбасы была представлена безопасными, в большинстве своем молочнокислыми, и некультивируемыми бактериями. В результате изучения методом одномерного электрофореза образцов К1 , К2 и К3 не выявлено ряда белковых полос, соответствующих структурным и конститутивным мышечным белкам, что свидетельствует об их деструкции в результате термической обработки (копчения) и жизнедеятельности микроорганизмов. Результатами двумерного электрофореза был подтвержден активный распад альдолазы, аконитазы и пируваткиназы. Также были обнаружены различия между образцами в отношении миозина, его легких цепей и миоглобина. Результаты проведенного гистологического анализа подтверждает развитие в колбасах микроорганизмов, а данные протеомного и масс-спектрометрического анализа подтверждает генерацию пептидов как продуктов их жизнедеятельности, холестерин-снижающий эффект которых был выявлен в исследованиях in vivo. Таким образом, научно обоснованы рецептуры и технологии мясных продуктов корригирующего действия. В острых и хронических опытах на лабораторных животных подтверждены гипохолестеринемические свойства модулей – посредством коррекции липидного профиля, а также стимулирования противовоспалительной реакции за счет нормализации распределения популяций лейкоцитов. Учитывая, что сердечно-сосудистые заболевания составляют значительную часть неинфекционных социально-значимых заболеваний населения РФ, разработанные модули обладают хорошим лечебным и профилактическим потенциалом для борьбы с указанной группой заболеваний.