КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер 17-13-01096

НазваниеИсследование физико-химических свойств новых противовирусных веществ – ароматических гетероциклических нитросоединений, с целью создания новых методов количественного определения основного вещества в субстанциях и лекарственных формах

РуководительРусинов Владимир Леонидович, Доктор химических наук

Организация финансирования, регион федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Уральский федеральный университет имени первого Президента России Б.Н. Ельцина", Свердловская обл

Период выполнения при поддержке РНФ 2017 г. - 2019 г. 

Конкурс№18 - Конкурс 2017 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований отдельными научными группами».

Область знания, основной код классификатора 03 - Химия и науки о материалах, 03-103 - Синтез, строение и свойства природных и физиологически активных веществ; медицинская химия и прогнозирование различных видов биоактивности

Ключевые словаПротивовирусные препараты, ароматические гетероциклические нитросоединения, азолоазины, электрохимические методы исследования

Код ГРНТИ31.15.15; 31.15.33; 31.19.29

СтатусУспешно завершен

 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
Проект направлен на развитие исследований в области одной из актуальных задач медицинской химии – синтез ароматических гетероциклических нитросоединений из ряда нитроазаиндолизинов, являющихся основными действующими веществами препаратов нового поколения противовирусного, антисептического, противоонкологического действия, а также необходимые для дофаминергической терапии (болезнь Паркинсона), нейропротективной терапии (болезнь Альцгеймера); получение новых знаний о физико-химических, в том числе, окислительно-восстановительных свойствах синтезированных веществ; установление возможных механизмов действия препаратов и создание на основе результатов исследований нового вольтамперометрического метода количественного определения основного вещества в субстанциях и лекарственных формах. Известен ряд ароматических гетероциклических нитросоединений (производные азагетероциклов и соединения семейства азолоазинов), проявляющих по результатам скрининга противовирусную, антисептическую, противоонкологическую активность. С другой стороны, является актуальным поиск и создание средств, воздействующих на рецепторы аденозина, обусловленный связью повышенной экспрессии этих рецепторов при протекании некоторых заболеваний. Так, пуринэргические рецепторы , ответственные за регуляцию клеточных функций, играют ключевую роль в возникновении и развитии различных тяжелых неизлечимых заболеваний: болезней Альцгеймера, Паркинсона, астмы, рака, сердечно-сосудистых заболеваний и проч. Лекарственные соединения – эффекторы данного типа рецепторов (AR) – еще не созданы, однако действие таких эффекторов на человеке и животных показывает, что взаимосвязь действия соединений в отношении аденозиновых рецепторов на биохимическом уровне и биологическая активность на уровне организма существует. Некоторое подобие электрохимических и биологических реакций позволяет предположить, что механизмы реакций окисления/восстановления, происходящих на электроде и в клетках живого организма, могут протекать по схожим принципам. Естественно предположить, что биохимическая активность синтезируемых молекул может быть связана, например, с восстановлением нитрогруппы. Использование высокочувствительных, экспрессных и точных электрохимических методов исследования (ЭМИ), метода электронно-парамагнитного резонанса позволяет изучить характер протекания быстрых ОВ процессов, в том числе сопровождаемых появлением радикальных интермедиатов. Поэтому для исследования биологически активных молекул будут использованы, в том числе, электрохимические, методы, позволяющие реализовать реакции окисления/восстановления соединений в «мягких» условиях, т.е. приближенных к организму человека. Получение новых знаний о физико-химических свойствах лекарственных соединений, в том числе, окислительно-восстановительных, помогут не только понять возможные метаболизмы протекания редокс процессов, оценить их фармакологическую активность, но и развивать подходы по созданию новых методов количественного определения изучаемых препаратов. Целью проекта является синтез, исследование и получение новых знаний о физико-химических, в том числе, окислительно-восстановительных, свойствах эффекторов аденозиновых рецепторов (AR), а именно азаиндолизинов – азолоазинов, содержащих мостиковый N-атом, в том числе би- и трициклические структуры, такие как ZM-241385, NECA, CGS21680 и UK-432097, содержащих азаиндолизиновую структуру, являющихся основными действующими веществами препаратов нового поколения при терапии болезней Альцгеймера, Паркинсона, астмы, рака, сердечно-сосудистых заболеваний и проч. Установление возможных механизмов действия препаратов и создание на основе результатов исследований нового вольтамперометрического метода количественного определения основного вещества в субстанциях и лекарственных формах. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи: - создание расчетной базы соединений, перспективных для разработки и исследования с точки зрения влияния на пуринэргичекие рецепторы и, зависящие от них, нейро-дегенеративные заболевания; - разработка методов синтеза наиболее актуальных нитроазаиндолизинов и необходимых для их создания нитросинтонов; - проведение биологических испытаний полученных соединений в отношении ингибирования пуринэргичеких рецепторов; - исследование электрохимической активности синтезированных препаратов методом циклической вольтамперометрии, хроноамперометрии; - установление принадлежности реакционной способности фрагментам молекул; - изучение процессов переноса электронов в электрохимической цепи трансдьюсер – раствор, содержащий основное действующее вещество лекарственного средства (ЛС), методами циклической вольтамперометрии; - исследование реакционной способности в условиях «мягкого» и «жесткого» окисления/восстановления в протонных и апротонных средах; - изучение кинетики электропревращения синтезированных азаиндолизинов – азолоазинов, содержащих мостиковый N-атом, в том числе би- и трициклических структур, аналогов ZM-241385, NECA, CGS21680 и UK-432097, содержащих азаиндолизиновую структуру методами циклической вольтамперометрии, хроноамперометрии и с использованием вращающего дискового электрода: расчет числа электронов, участвующих в реакции, установление лимитирующей стадии, констант скорости; - исследование образования интермедиата и определение его структуры с использованием вольтамперометрии и ЭПР; - исследование реакционной способности синтезированных препаратов в зависимости от рН; - исследование и выбор условий для электрохимического синтеза предполагаемых метаболитов (интермедиатов) синтезированных препаратов; - на основе проведенных исследований осуществить выбор сигналообразующей реакции и условий для формирования аналитического сигнала: режимов поляризации электрода в процессе концентрирования и электропревращения определяемого вещества, влияние природы и концентрации фонового электролита, типа токопроводящего трансдьюсера; разработать технологию получения оригинальных толстопленочных модифицированных электродов методом трафаретной печати; - разработать подробный алгоритм процедуры анализа субстанции и готовой формы лекарственного вещества; - выполнить процедуру валидации разработанных методик анализа.

Ожидаемые результаты
Первый год: - будет осуществлен молекулярный дизайн in silico и выбор наиболее перспективных структур - ингибиторов пуринэргических рецепторов для для построения азаиндолизинового скелета, и разработка методов их последующего направленного химического синтеза; - будет осуществлен выбор нитросинтонов, необходимых для построения азаиндолизинового скелета, и разработан метод их синтеза; - будет синтезирован ряд новых, а также усовершенствован способ синтез известных нитроазоло[5,1-с]триазинов - перспективных эффекторов AR; - будет проведена интерпретация окислительно-восстановительных превращений основного действующего вещества лекарственных препаратов на примере синтетических нитроазаиндолизиновых препаратов; - будет проведена оценка критериев обратимости этих превращений, коэффициентов диффузии, числа электронов и протонов, принимающих участие в реакциях, - будет проведена установка принадлежности того и или иного превращения конкретному фрагменту молекулы; - будет сделан выбор сигналообразующей реакции. Второй год: - будет создана расчетная база соединений, перспективных для разработки и исследования с точки зрения влияния на аденозиновые рецепторы и зависящие от них нейро-дегенеративные заболевания; - будет осуществлен синтез ряда новых, а также усовершенствование способов синтеза известных нитроазоло[1,5-а]пиримидинов - перспективных эффекторов пуринэргических рецепторов; - будут созданы водорастворимые формы разрабатываемых соединений; - оптимизация синтеза, выбор перспективных органических молекул- канидатов; - будет исследована реакционная способность в условиях «мягкого» и «жесткого» окисления/восстановления в протонных и апротонных средах; - исследование образования интермедиата и определение его структуры с использованием вольтамперометрии и ЭПР; - будет исследована реакционная способность синтезированных препаратов в зависимости от рН; - будет проведено исследование и выбор условий для электрохимического синтеза предполагаемых метаболитов (интермедиатов) синтезированных препаратов. Третий год: - будет осуществлена наработка перспективных кандидатов для проведения биологических испытаний и валидации методик количественного анализа; - будут проведены биологические испытания полученных соединений в отношении ингибирования аденозиновых рецепторов - будет разработана технология получения оригинальных толстопленочных модифицированных электродов методом трафаретной печати; - будет разработана подробный алгоритм процедуры анализа субстанции и готовой формы лекарственного вещества; - будет выполнена процедура валидации разработанных методик анализа. Соответствие мировому научному уровню предлагаемых исследований и разработок обуславливается заинтересованностью в этой тематике таких мировых лидеров - крупных международных фармацевтических компаний как F. Hoffmann-La Roche, Novartis, Merck и др. Разработка и создание эффекторов AR в ряду азаиндолизинов позволят создать российские фарм. препараты, конкурирующие с зарубежными аналогами или превосходящие их по эффективности или экономическим показателям. В химической составляющей проекта новизной является разработка методов синтеза новых соединений – «строительных блоков» – для создания нитроазаиндолизинов. Новые «строительные блоки» позволят расширить возможности синтеза актуальных структур в ряду азаиндолизинов. В настоящее время существует необходимость применения в фармацевтическом контроле высоко эффективных методов анализа, позволяющих снижать расходы и сокращать потребление органических растворителей. Использование более простых, быстрых, дешевых, но при этом достаточно чувствительных методов анализа может стать достойной альтернативой существующим подходам. Электрохимические методы анализа, в частности вольтамперометрия. которые в настоящее время применяются в фармацевтическом анализе не столь широко, впервые будут реализованы в представленногм проекте в разработке простых, чувствительных, недорогих методик количественного фарманализа. Использование модифицированных толстопленочных графитсодержащих электродов позволит достичь превосходных электроаналитических характеристик, таких как широкая область рабочих потенциалов, низкий остаточный ток и хорошая биологическая совместимость. В настоящее время методики по определению нитроазаиндолизинов с использованием электрохимических методов из литературных источников неизвестны.

 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Аннотация результатов, полученных в 2017 году
В ходе выполнения работ по проекту, запланированных на первый год, было осуществлено компьютерное моделирование взаимодействий предлагаемых нами соединений с определенными рецепторами, находящимися в организме. Компьютерное моделирование позволяет приблизительно узнать, какие из предлагаемых соединений с большей вероятностью будут благоприятно взаимодействовать с организмом, вызывая нужные биологические ответы, результатом которых может быть излечение от некоторых нейродегенеративных заболеваний (например, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера). Для осуществления работ по проекту предлагалось несколько рядов соединений с вероятным эффектом на рецепторы; наиболее перспективные соединения, которые оценены на пригодность методом компьютерного моделирования, будут исследованы in vivo на следующих стадиях выполнения проекта. В текущем году были разработаны методы и осуществлен синтез соединений ряда азоло[5,1-с][1,2,4]триазинов, а также предшественников, необходимых для их синтеза. Исследование окислительно-восстановительных превращений синтезированных молекул на примере 2-R-6-Х-1,2,4-триазол [5,1-с] [1,2,4] триазин-7-онов и 5-метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидинидов проводили методами циклической вольтамперометрии и хроноамперометрии. Для установления принадлежности электрохимического сигнала конкретному фрагменту молекулы изучали процессы электропревращения 2-метилтио-6-X-1,2,4-триазоло-[5,1-c][1,2,4]триазин-7-онов и 5-метил-6-X-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидинидов (соединения I- VII), содержащих и не содержащих нитрогруппу методом циклической вольтамперометрии (ЦВА). Было установлено, что для соединений, имеющих в своей структуре нитрогруппу, наблюдается пик восстановления, который отсутствует на ЦВА соединений, не содержащего нитрогруппу. Следовательно, полученный катодный сигнал обусловлен протеканием процесса электровосстановления нитрогруппы, связанной с сопряженной ароматической системой. Число электронов, участвующих в процессе электровосстановления было рассчитано исходя из соотношения количества электричества, затраченного на восстановление нитрогруппы синтезированных соединений и известного модельного вещества. Несмотря на схожесть молекул веществ I и V, необратимый одноволновый процесс восстановления нитрогруппы соединения V, зарегистрированный в аналогичных условиях, наблюдается при более отрицательном потенциале. В ходе проведения исследований были решены все поставленные задачи, запланированные по реализации проекта в 2017 году. Показана возможность применения метода прямой вольтамперометрии и хроноамперометрии для определения природы протекающих процессов, в том числе, природы лимитирующей стадии, расчета количества электронов, принимающих участие в процессах электровосстановления нитросодержащих соединений класса азоло-азинов. Установлена принадлежность тока электровосстановления нитрогруппе молекул. Показана необратимость процессов электрохимического восстановления синтезированных соединений. Подобраны условия методики эксперимента для достижения стабильных и воспроизводимых данных электровосстановления нитрогруппы соединений 2-R-6-Х-1,2,4-триазол [5,1-с] [1,2,4] триазин-7-онов и 5-метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидинидов. Установлено, что скорость восстановления нитрогруппы соединений I и V контролируется диффузией, процесс восстановления нитрогруппы соединений является необратимым и протекает при потенциале -0,35В с присоединением 4 электронов для 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло-[5,1-c][1,2,4]триазина-7 и при потенциале -0,65 В с присоединением 6 электронов для 5-метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидинида. Полученные результаты дают основание использовать ток электровосстановления нитрогруппы данных соединений в качестве сигналообразующей электрохимической реакции для последующей разработки методик электрохимического определения основного действующего вещества в соответствующих фармпрепаратах.

 

Публикации

1. Иванова А.В., Козицина А.Н., Михальченко Л.М., Баушева А.В., Цмокалюк А.Н., Уломский Е.Н., Русинов В.Н. REDOX CONVERSIONS OF NEW ANTIVIRAL DRUG TRIAZAVIRIN®: PART I. ELECTROCHEMICAL and EPR STUDIES Journal of Electroanalytical Chemistry, - (год публикации - 2018)

2. Уломский Е.Н., Ляпустин Д.Н., Мухин Е.М., Воинков Е.К., Федотов В.В., Саватеев К.В., Ельцов О.С., Горбунов Е.Б., Дрокин Р.А., Русинов В.Л., Чупахин О.Н. ANRORC процесс в 4-алкилазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-онах Химия гетероциклических соединений, - (год публикации - 2018)

3. Русинов В.Л., Чарушин В.Н., Чупахин О.Н. Биологически активные азоло-1,2,4-триазины и азолопиримидины Известия академии наук. Серия химическая, - (год публикации - 2018)

4. Свалова Т. С., Малышева Н. Н., Козицина А. Н. Структура рецепторного слоя в электрохимических иммуносенсорах. Современные тенденции и перспективы развития Известия Академии наук. Серия химическая, №10, стр. 1797-1811 (год публикации - 2017)

Аннотация результатов, полученных в 2018 году
В ходе выполненных в 2018 году работ по проекту были выполнены компьютерные расчета предполагаемой активности разрабатываемых соединений в отношении аденозиновых А2а- и А3-рецепторов, с работой которых связывают такие заболевания, как болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, псориаз, ревматоидный артрит, диабетическая нефропатия, а также сепсис. В текущем году были разработаны методы синтеза новых синтетических эквивалентов, с участием которых были разработаны эффективные методы синтеза соединений нитроазоло[1,5-а] пиримидинового ряда. Были разработаны методы синтеза водорастворимых форм, предлагаемых нитроазолопиримидинов, что зачастую является существенным недостатком для лекарственных средств. Путем исследования превращений синтезированных молекул на примере веществ класса 2-R-6-нитро-1,2,4-триазол [5,1-с] [1,2,4] триазин-7 в условиях «мягкого» и «жесткого» окисления/восстановления в протонной и апротонной средах установили, что механизм восстановления нитро соединений данного класса препаратов напрямую зависит от рН: чем выше степень протонирования среды, тем выше реакционная способность веществ. Совокупность методов вольтамперометрии и ЭПР-спектроскопии позволила предположить радикальной характер превращений нитрогруппы препаратов класса 2-R-6-нитро-1,2,4-триазол [5,1-с] [1,2,4] триазин-7. Результаты анализа методом ВЭЖХ/МСВР образцов после электрохимического синтеза промежуточных продуктов показали наличии продуктов димерного строения, которые косвенным образом подтверждают предположение о радикальном механизме реакций восстановления нитротриазолотриазинов. Совокупность полученных данных в 2017 и 2018 гг позволяют сделать предположение о возможных механизмах реакций восстановления веществ класса 2-R-6-нитро-1,2,4-триазол [5,1-с] [1,2,4] триазин-7.

 

Публикации

1. Бажин Д.Н., Кудякова Я.С., Слепухин П.А., Бургарт Я.В., Малышева Н.Н., Козицина А.Н., Иванова А.Н., Богомяков А.С., Салоутин В.И. Dinuclear copper(ii) complex with novel N,N',N'',O-tetradentate Schiff base ligand containing trifluoromethylpyrazole and hydrazone moieties Mendeleev Communications, V. 28, #2, p. 202–204 (год публикации - 2018) https://doi.org/10.1016/j.mencom.2018.03.032

2. Воинков Е.К., Дрокин Р.А., Уломский Е.Н., Слепухин П.А., Русинов В.Л., Чупахин О.Н. Crystal Structure of Medicinal Product Triazavirin Journal of Chemical Crystallography, - (год публикации - 2019) https://doi.org/10.1007/s10870-018-0750-2

3. Малахова Н.А., Ивойлова А.В., Замана А.А., Русинов В.Л., Иванова А.В., Козицина А. Н. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСНОВНОГО ВЕЩЕСТВА ПРОТИВОВИРУСНОГО ПРЕПАРАТА ТРИАЗИД® С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ Журнал аналитической химии, - (год публикации - 2019)

Аннотация результатов, полученных в 2019 году
В ходе выполненных в 2019 году работ по проекту были разработаны методы синтеза аминопиразолов, содержащих в составе молекулы ароматические и гетероароматические фрагменты, а также трифторметильную группу. На основе пиразолов были синтезированы пиразоло[1,5-а]пиримидины и пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазины, которые были спрогнозированы на предыдущем этапе работ как перспективные эффекторы аденозиновых А2а- и А3-рецепторов. Также были разработаны методы синтеза аминотиодиазолов, содержащих (гетеро)ароматические заместители, и созданы на их основе тиадиазоло[3,2-а]пиримидины. В целях создания вольтамперометрической методики определения 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-α]пиримидинида l-аргининия моногидрата в фармацевтической субстанции: Были оптимизированы условия получения аналитического сигнала анализируемого вещества на стеклоуглеродном и толстопленочном угольнопастовом электродах. Был предложен простой и экспрессный способ устранения мешающего влияния растворенного кислорода с помощью сульфита натрия. Были проведены исследования по поиску оптимального материала для создания чувствительного электрохимического сенсора, способам его регенерации и модифицирования поверхности. Разработан чувствительный электрохимический сенсор на основе углеродсодержащих чернил марки «Electrodag 407С», модифицированный суспензией сажи массой 2,5 мкг, для количественного определения 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-α]пиримидинида l-аргининия моногидрата в фармацевтической субстанции. Был выбран режим и условия вольтамперометрических измерений для фармацевтической субстанции 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-α]пиримидинида l-аргининия моногидрата. Была разработана и валидирована по актуальным требованиям Государственной Фармакопеи РФ XIII издания вольтамперометрическая методика определения 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-α]пиримидинида l-аргининия моногидрата в фармацевтической субстанции. Метрологические характеристики данного способа: предел обнаружения составляет 4,9·10-6 моль/дм3. Область определяемых содержаний ТД: от 2,6·10-5 до 1,3·10-3 моль/дм3. Относительная ошибка определения не превышает 1 %. Разработанный метод соответствует критериям прецизионности для электроанализа, является правильным и селективным, что позволяет использовать его для анализа фармацевтической субстанции на содержание основного вещества. Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования предлагаемого электрохимического сенсора для аналитического контроля качества и количества 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-α]пиримидинида l-аргининия моногидрата в фармацевтической субстанции и готовой форме на производстве. Были проведены биологические исследования в отношении влияния синтезированных соединений на А1-аденозиновые рецепторы in vitro, а также влияние синтезированных соединений на уровень внутриглазного давления интактных крыс in vivo.

 

Публикации

1. Ляпустин Д.Н., Уломский Е.Н.,Занахов Т.О., Русинов В.Л. Three-Component Coupling of Aromatic Aldehydes, 1-Morpholino-2-nitroalkenes, and 3-Aminoazoles via Boron Trifluoride Etherate Catalysis: Reaction Pathway and Features of the Formation of Intermediates Journal of Organic Chemistry, Онлайн-публикация (год публикации - 2019) https://doi.org/10.1021/acs.joc.9b02286

2. Малахова Н.А., Цмокалюк А.Н., Ивойлова А.В., Тумашов А.A, Русинов В.Л., Иванова А.В. и Козицина А.Н. Development and Validation of Voltammetric Method for Quantitation of New Antiviral Drug Triazavirin using Bare Carbon Screen-Printed Electrodes Anal. Bioanal. Electrochem., Vol. 11, No. 3, 2019, 292-303 Analytical & Bioanalytical Electrochemistry, Vol. 11, No. 3, 2019, 292-303 (год публикации - 2019)

3. Т. С. Свалова, А. А. Сайгушкина, М. В. Медведева, Н. Н. Малышева, В. О. Ждановских, И. В. Козицын и А. Н. Козицына Modification of Gold Electrode via Electrografting of the in situ Generated 3-Carboxy-1,2,4-triazoldiazonium Salt for Label-free Determination of Carcinoembryonic Antigen Electroanalysis, Electroanalysis 2019, 31, 1– 9 (год публикации - 2019) https://doi.org/10.1002/elan.201900457

4. Козицина А.Н., Свалова Т.С., Малышева Н.Н., Охохонин А.В., Видревич М.Б., Брайнина Х.З. Sensors based on bio and biomimetic receptors in medical diagnostic, environment, and food analysis Biosensors, Biosensors 2018, 8(2), 35 (год публикации - 2018) https://doi.org/10.3390/bios8020035

5. Федотов В.В., Саватеев К.В., Мальцев М.А., Уломский Е.Н., Русинов В.Л. CYANMORPHOLINOETHYLENE IN THE SYNTHESIS OF RELEVANT AZOLOAZINES AIP CONFERENCE PROCEEDINGS, AIP Conference Proceedings 2063, 040015 (2019) (год публикации - 2019) https://doi.org/10.1063/1.5087347

Возможность практического использования результатов
Практическое использование результатов, полученных в ходе выполнения проекта, находятся в области повышения качества жизни человека в направлении создания и применения новых лекарственных средств. Результаты работы могут служить научным заделом для разработки и создания лекарственных препаратов, эффективных для лечения глаукомы, повышенного внутриглазного давления и сердечно-сосудистых заболеваний. Показана возможность применения метода прямой вольтамперометрии и ЭПР-спектроскопии для определения природы протекающих процессов, в том числе, природы лимитирующей стадии, расчета количества электронов, принимающих участие в процессах электровосстановления нитросодержащих фармпрепаратов класса азоло-азинов и азоло-пиримидинидов. Подобраны условия методики эксперимента для достижения стабильных и воспроизводимых данных электровосстановления нитрогруппы класса 2-R-6-нитро-1,2,4-триазол [5,1-с] [1,2,4] триазин-7 и 5-R-6- нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидинидов электрохимическим методом. Результаты анализа комбинированными методами ЭПР спектроскопия/ электрохимия и ВЭЖХ/МСВР образцов после электрохимического синтеза промежуточных продуктов показали наличии продуктов димерного строения, которые косвенным образом подтверждают предположение о радикальном механизме реакций восстановления нитротриазоло-триазинов и нитроазоло-пиримидинидов. Установлена линейная зависимость значений максимального тока при потенциалах первой стадии восстановления нитрогруппы веществ класса нитротриазоло-триазинов и нитроазоло-пиримидинидов. Полученные результаты дают основание использовать ток электровосстановления нитрогруппы данных соединений в качестве сигналообразующей электрохимической реакции для последующей разработки методик электрохимического определения основного действующего вещества в фармпрепаратах. Разработан подробный алгоритм процедуры анализа субстанции и готовой формы лекарственного вещества 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-α]пиримидинида l-аргининия моногидрата как на толстопленочных электродах выполненных методом трафаретной печати на основе графитосодержащих чернил марки «Elecrtrodag 407С», так и на дисковом стеклоуглеродном электроде. Выполнена процедура валидации разработанных методик анализа лекарственного вещества 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-α]пиримидинида l-аргининия моногидрата. Данное изобретение может быть использовано как в лабораториях фармацевтического контроля для определения 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-α]пиримидинида l-аргининия моногидрата в порошке и его лекарственных формах, так и в фармацевтической промышленности для контроля технологических процессов и качества фармпрепаратов, сточных вод и воздушной зоны химико-фармацевтических предприятий.